Marvel's Spider-Man 2 یک بازی ویدئویی اکشن ماجراجویی تک نفره است که از منظر سوم شخص بازی می شود. مانند بازی اول، پیتر پارکر و مایلز مورالز دو شخصیت اصلی هستند، با مری جین و ونوم که در ماموریت‌های خاصی قابل بازی هستند، در حالی که در شهر نیویورک جهان باز می‌روند و با دشمنان می‌جنگند، به‌صورت جداگانه و مطابق با داستان قابل بازی هستند. بازیکنان می توانند توانایی های جدیدی به دست آورند و لباس های مختلف مرد عنکبوتی را جمع آوری کنند. پیتر و مایلز را می توان آزادانه در هر نقطه ای در حین پرسه زدن آزاد در دنیای باز بازی بین آنها رد و بدل کرد و مأموریت های اختصاصی هم در داستان اصلی و هم به عنوان بخشی از محتوای جانبی دارند که از ویژگی های فردی آنها بهره می برد. بازی بر روی دنیای باز ورودی‌های قبلی گسترش می‌یابد و به بازیکنان این امکان را می‌دهد تا علاوه بر منهتن، که محیط اصلی دو بازی قبلی بود، بروکلین و کوئینز را نیز کاوش کنند.

بر اساس سیستم مبارزه عناوین قبلی، هر دو مرد عنکبوتی قادر به مقابله با حملات فیزیکی هستند، زیرا انواع خاصی از دشمنان در برابر طفره رفتن غیرقابل نفوذ هستند. در حین پیمایش، لباس‌های جدید پیتر و مایلز به Web Wings مجهز می‌شوند که در صورت استقرار، به آن‌ها اجازه می‌دهد تا در سطح شهر سر بخورند، با افزایش سرعت و مسافت تحت پوشش در هنگام استفاده از مناطقی مانند تونل‌های باد. چرخ اسبابک هر مرد عنکبوتی با حالت‌های تجهیز اضافی برای تیراندازهای وب خود ارتقا یافته است، از جمله اینکه می‌توانند یک Web Line را روی ستون‌ها قرار دهند تا در طول توالی‌های مخفی کاری که بالای دشمنان معلق هستند، و Web Grabber، که به دشمنان متعدد اجازه می‌دهد. به یک نقطه جدا شده برای Stealth Takedowns کشیده شده است، که می تواند همزمان روی دو دشمن انجام شود. علاوه بر گیم‌پلی استاندارد پیتر پارکر، زمانی که به سمبیوت Venom متصل می‌شود، می‌توان آن را بازی کرد و به او پیچ‌هایی می‌دهد که می‌تواند در مبارزه و توانایی‌های منحصر به فرد مبتنی بر وب استفاده کند. هر دو مرد عنکبوتی دارای درخت‌های مهارت فردی با قابلیت‌های بازگشایی اضافی برای هر دوی آن‌ها هستند، پس از جمع‌آوری امتیاز مهارت کافی مطابق با سطح تجربه‌شان، و همچنین درخت مهارت سومی که به توانایی‌های مشترک بین آنها اختصاص داده شده است.